ELISA試劑盒單克隆抗體制備時(shí)很多朋友會(huì)遇到這樣的問題，即咱們免疫用的蛋白為原核表達(dá)蛋白而意圖蛋白是真核蛋白或病毒等，由于沒有規(guī)范品咱們做出來(lái)的抗體沒有辦法用規(guī)范品來(lái)驗(yàn)證是否與其發(fā)作反響，終究導(dǎo)致咱們做出的是無(wú)用抗體。以下內(nèi)容為試驗(yàn)室技能總結(jié)的幾種辦法，期望對(duì)大家有所協(xié)助。
一、若要檢測(cè)的抗原為某種新的病毒
ELISA試劑盒辦法：1、很多做出該病毒某個(gè)蛋白的單克隆抗體；
2、很多收集該病毒疑似感染動(dòng)物或人血液，用PCR的辦法進(jìn)一步斷定每份血液是否真的有該病毒存在；
3、將你做出的很多抗體中的一個(gè)做符號(hào)作為符號(hào)抗體，其他一切抗體作為包被抗體，檢測(cè)第二步中斷定陽(yáng)性的血清，成果與陰性血清做比照，并畫出點(diǎn)狀分布圖。若陽(yáng)性血清大部分的點(diǎn)在陰性血清之上祝賀你找到配對(duì)抗體了；若成果相差不大，請(qǐng)從頭符號(hào)一株抗體做相同試驗(yàn)。
二、若要檢測(cè)抗原為某一細(xì)胞因子
ELISA試劑盒辦法：1、通過超表達(dá)的辦法樹立安穩(wěn)表達(dá)的細(xì)胞系，留意要在意圖蛋白上加相應(yīng)的標(biāo)簽，以便純化。若僅僅是找到配對(duì)抗體則不需求純化甚至不需求樹立安穩(wěn)表達(dá)的細(xì)胞系瞬時(shí)轉(zhuǎn)染就可完成，若要進(jìn)一步作出規(guī)范曲線請(qǐng)純化。
2、 將細(xì)胞系樹立后，咱們就可以拿到規(guī)范品了，做配對(duì)作業(yè)就相應(yīng)簡(jiǎn)略。
3、若該種細(xì)胞因子可有某種陽(yáng)性影響物很多影響而來(lái)，也可不做細(xì)胞系。用陽(yáng)性影響物影響，咱們細(xì)胞影響物的上清液來(lái)做規(guī)范品也可。
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