進口ELISA試劑盒使用方法:
1、組織固定于10%的福爾馬林中,常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚4μm,常規(guī)脫蠟至水。
3、用配制好的Weigert氧化劑氧化5min。
4、稍水洗。
5、用Weigert漂白劑漂白1~2min。
6、流水沖洗2min。
7、95%的乙醇稍洗。
8、切片入裝有Weigert品紅染色液的染色缸(加蓋)中,室溫下染色1~3h。
9、用酸性分化液分化至無染液脫下,約2~3s。
10、流水沖洗10min。
11、VG染色液復染30s。
12、急速用水洗一下,立刻用95%的乙醇快速分化和脫水。
13、常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固。
進口ELISA試劑盒操作步驟:
1、標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后進口ELISA試劑盒在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為300ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L,25ng/L)。
2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。
3、加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
4、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
5、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
6、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿進口ELISA試劑盒洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
7、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
8、溫育:操作同3。
9、洗滌:操作同5。
10、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
11、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
12、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。