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進口ELISA試劑盒實驗原理及步驟
  • 發(fā)布日期:2021-02-24      瀏覽次數(shù):1092
    • 進口ELISA試劑盒實驗原理:

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)水平。用純化的兔氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL),再與HRP標記的羊抗兔抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中兔氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)濃度。


      進口ELISA試劑盒性能:
       
      1.準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。

      2.靈敏度:zui低檢測濃度小于10 pg/ml。

      3.特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

      4.重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。


      進口ELISA試劑盒操作步驟:

      1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。

      2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

      3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

      4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

      5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

      6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

      7. 溫育:操作同3。

      8. 洗滌:操作同5。

      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

      10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
       

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