公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

HA(人羊膜細胞) 5×106cells/瓶×2 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基ECM 大鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA 試劑盒 TUNEL 細胞凋亡原位檢測試劑盒(我公司提供代測服務) 50人份

Mitochondrial Pyruvate dehydrogenase kinase 1： 酸脫氫酶激酶1抗體 CM-R118大鼠虹膜色素上皮細胞培養(yǎng)基100mL

IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (His 標簽) 大鼠游離原卟啉(FEP)ELISA試劑盒 STK(Reat serine/threonine protein kinase,STK)  大鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶 96T

MAPK11： 原活化的蛋白激酶p38β抗體 XCL2 Others Human 人 XCL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠腎小球內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠游離狀腺原酸(fT3)ELISA試劑盒 LH  魚促黃體激素 96T

人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;MuM-2B 人抗核因子抗體(ANF)ELISA 試劑盒 NKR ; Neurokin B receptor (Neuromedin K receptor; NK-4 receptor) 神經(jīng)激肽-B受體(抗原) 0.5mg

HOXA13： 同源異型盒基因HOXA13抗體 人胚腎上皮細胞系;KiMA

HCC1937(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0377LLC-WRC 256(大鼠腹水癌細胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)ELISA 試劑盒 ATF3 (Activating Transcription Factor3) 活化轉錄因子3抗原 0.5mg

Phospho-HDAC4 (Ser246)： 0酸化組蛋白去乙?；?span>4(Ser246)抗體 人骨骼肌細胞RNAHSkMC miRNA5 μg

SF126(人腦瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA 試劑盒 ATM(ataxia telangiectasia mutated) 毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗原 0.5mg

DMS 114人小細胞肺癌細胞非洲綠猴腎細胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E1 大鼠肌肉0酸果糖激酶(PFKM)ELISA試劑盒 AFA(Human anti-filaggrin antibody)  人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體 兔角膜前基質層成纖維細胞;RCFBF

大鼠雪旺細胞(RSC)(5×105) 786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞 Human 大鼠肌球蛋白重鏈8(MYH8)ELISA試劑盒 TF  大鼠組織因子 96T

PTGFR： 前列腺素F2a受體抗體 人腎系膜細胞裂解物HRMCL

PGF Protein Mouse 重組小鼠 PIGF / PLGF 蛋白 大鼠肌球蛋白重鏈7(MYH7)ELISA試劑盒 CCP(Human anti-cyclic citrullinated peptide)  人抗環(huán)胍酸肽抗體 GPT2 Others Rat 大鼠 GPT2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

HL-60 人原髓細胞白血病細胞 大鼠肌球蛋白重鏈6(MYH6)ELISA試劑盒 IL-27(Mouse Interleukin 27) 小鼠白介素27 96T