各位從事科研工作的小伙伴們，實(shí)驗(yàn)中所用到的試劑、配制試劑的液體，有時(shí)可能是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，因此大家在使用時(shí)一定要留意各種試劑的級(jí)別。原則上講，純度越高越好，但是價(jià)格也就越高，所以要根據(jù)各自的需要選擇合適的品質(zhì)，避免不必要的浪費(fèi)！

T4 DNA連接酶9015-85-4
英文名稱(chēng)：T4 DNA Ligase 
：9015-85-4
分子量：55.3kDa，單體
級(jí)別：BR
來(lái)源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
活性定義：是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中，37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個(gè)weiss單位相當(dāng)于約200個(gè)粘性末端連接單位。1個(gè)粘性末端連接單位：20ul反應(yīng)體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量） 
抑制劑：當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過(guò)200 mM時(shí)，可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意：T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會(huì)改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉(zhuǎn)化時(shí)，連接產(chǎn)物的體積不得超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%；電轉(zhuǎn)化之前，先用方抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
T4 DNA連接酶9015-85-4質(zhì)量控制：測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測(cè)：粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀(以下信息僅供參考)：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù)；連接酶介導(dǎo)的RNA檢測(cè)；位點(diǎn)特異性突變；擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性
保存： -20°C

產(chǎn)品規(guī)格
GR：優(yōu)級(jí)純。主成份含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準(zhǔn)物質(zhì).
AR：分析純。主成份含量很高、純度較高，干擾雜質(zhì)很低，適用于工業(yè)分析及化學(xué)實(shí)驗(yàn)。
CP：化學(xué)純。主成份含量高、純度較高，存在干擾雜質(zhì)，適用于化學(xué)實(shí)驗(yàn)和合成制備。
LR：實(shí)驗(yàn)純。主成份含量高、純度較差，雜質(zhì)含量不做選擇，只適用于一般化學(xué)實(shí)驗(yàn)和合成制備。
BR：生化試劑。用于配制生物化學(xué)檢驗(yàn)試液，和生化合成。質(zhì)量指標(biāo)注重生物活性雜質(zhì)?？商娲甘緞┖陀袡C(jī)合成。
BS：生物染色劑。適用于配制生物標(biāo)本染色液。質(zhì)量指標(biāo)注重生物活性雜質(zhì)?？商娲甘緞┖陀袡C(jī)合成。
T4 DNA連接酶9015-85-4Ind：顯色劑。
HPLC：適用于高壓液相色譜的試劑。
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試劑開(kāi)瓶的問(wèn)題
隨著全自動(dòng)生化分析儀的普及，“開(kāi)瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學(xué)來(lái)講，還達(dá)不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內(nèi)放很長(zhǎng)時(shí)間不需要定標(biāo)，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開(kāi)瓶后試劑會(huì)吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標(biāo)或校準(zhǔn)，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏離，在國(guó)外有的項(xiàng)目有明文規(guī)定，必須72小時(shí)之標(biāo)，比如BUN。但是在國(guó)內(nèi)的某些實(shí)驗(yàn)室為了方便，很長(zhǎng)時(shí)間都不作校準(zhǔn)，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確。解決辦法：了解試劑的特性，及時(shí)對(duì)部份項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院，可按1～2天的用量取用試劑放入儀器。

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