公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MMP-3： 基質(zhì)金屬蛋白酶3抗體 敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21

IL33 Protein Canine 重組狗 IL33 / Ierleukin-33 / NF-HEV 蛋白 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)ELISA試劑盒 IFI16/p16(Human interferon-inducible protein 16)  人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16 96T

MMP-7： 基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體 SERPINB4 Others Human 人 SerpinB4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA 試劑盒 SDF-1a/CXCL12(Human Stromal cell derived factor 1a)  人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a 96T

MMP9： 基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體 BEL-7404細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人子宮膜腺癌細(xì)胞,HEC-1-B細(xì)胞 小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過(guò)表達(dá));LA1-VAP33-GFP

HEXA： β基己糖苷酶A抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0902

MFC(小鼠胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 C2 / Compleme Compone 2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)ELISA 試劑盒 GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2) 促代謝型谷酸受體2抗原 0.5mg

HECW1： 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白HECW1抗體 尿道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基UCM-prf

CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 人低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA 試劑盒 GRO Alpha/GRO/MGSA/CXCL1 protein (growthregulated oncogene Alpha) 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生激因子α 抗原 0.5mg

HAAO： 3-羥苯雙加氧酶抗體 HFE2 Others Cynomolgus 食蟹猴 Hemojuvelin / HFE2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

NALM-6人前B急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞人肝細(xì)胞;HL-7702[L-02] 人外周血白細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠酶1(PON1)ELISA試劑盒 ER(Human Estrogen Receptor)  人雌激素受體 96T

PID1： 0酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 眼晶狀體上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

LGALS1 Protein Human 重組人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白 大鼠端粒酶關(guān)聯(lián)蛋白1(TEP1)ELISA試劑盒 GM-CSF  大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子 96T

PPP2R1A： 蛋白質(zhì)0酸酶2調(diào)節(jié)亞基1A抗體 LRG1 Others Human 人 LRG1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

NCI-H1395 人肺腺癌細(xì)胞 大鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒 U S-GH(Human Ultra Sensitive growth hormone)  人超敏生長(zhǎng)激素 96T