公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

商品屬性

 RAPA HiFi DNA 聚合酶，其來源于高保真 DNA 聚合 酶，并加入了增強(qiáng)的延伸結(jié)構(gòu)，使其具有超保真性能（~280 倍 Taq）、長片段擴(kuò)增能力、高產(chǎn)量。長片段擴(kuò)增能力，使用 該酶可輕松擴(kuò)增 8kb 的基因組 DNA、20kb 的λDNA、8kb 的 cDNA。該酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、強(qiáng) 3’-5’的外切酶活性，產(chǎn)物為平末 端。

特點(diǎn)和用途
(1) 超保真擴(kuò)增：~280 倍 Taq 的保真性能，是載體構(gòu)建、點(diǎn)突變、NGS 模板擴(kuò)增、基因合成的用酶。
(2) 快速擴(kuò)增：具有 6kb/min 的擴(kuò)增能力。
(3) 長片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λDNA 等簡單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb，cDNA 可以有效擴(kuò)增>8kb。
儲(chǔ)存：長期儲(chǔ)存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個(gè)月）保存。
使用方法
1. 按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻：
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
模板 DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl
*模板 DNA 用量參數(shù)(25 μl 反應(yīng)體系)
5-250 ng Genomic DNA
 0.1-10 ng Plasmid DNA
 1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)
（1）擴(kuò)增片段<5kb 時(shí)采用如下程序
循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
1
st Cycle 95°C 1min
25-35 Cycles
95°C 30s
50~60°C 30s
72°C 6kb/min
Last Cycle 72°C 2min
（2）擴(kuò)增片段>5kb 時(shí)采用如下程序
循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
1st Cycle 92°C 1min
25-35 Cycles
92°C 10s
50~60°C 30s
72°C 2-3kb/min
Last Cycle 72°C 2min
3. 電泳：1% 瓊脂糖凝膠電泳，上樣 5 μl，電泳結(jié)束在紫外燈下檢測條帶。
4. 注意事項(xiàng)：（1）當(dāng)模板 GC 含量>65%時(shí)，請(qǐng)?zhí)砑?× Q-Solution（Cat. No.: A3002）。（2）當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb 時(shí)，延伸時(shí)間可直接使用 15s，當(dāng)擴(kuò)增片段>5kb 時(shí)，按照2-3kb/min 的延伸時(shí)間進(jìn)行設(shè)置，能獲得更高的產(chǎn)量。（3）由于不同的 PCR 管其導(dǎo)熱性能有所不同，通常 PCR 采用25μl 體系可以獲得更高的產(chǎn)量。

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